（中國科學(xué)報 記者 王晨緋通訊員 湯華波）
病原微生物的耐藥性問題，在人類醫(yī)學(xué)水平日新月異的今天，已經(jīng)不僅僅是一個讓臨床醫(yī)生頭疼并尷尬的問題，更是日益演變成了一場正在威脅全球健康的危機(jī)。
　　在剛剛過去的4月，世界衛(wèi)生組織發(fā)布全球首份抗生素耐藥性監(jiān)測報告，稱“抗生素危機(jī)將比上世紀(jì)80年代的艾滋病疫情更嚴(yán)重”。據(jù)統(tǒng)計，我國人均使用抗生素的劑量是美國的十多倍，“今天不采取行動，明天就無藥可用”。
　　危機(jī)何解？科學(xué)家們?yōu)榇嗽谂?。近日，中科院武漢病毒研究所危宏平研究團(tuán)隊(duì)提出了一種耐藥性快速檢測新策略（GPF策略），已經(jīng)成功用于多種病原微生物的耐藥性快速檢測。
　　耐藥性危機(jī)
　　所謂耐藥性，指的是臨床上當(dāng)病原微生物多次與藥物接觸后，對藥物的敏感性減小甚至消失，致使藥物對耐藥菌的療效降低甚至無效。
　　科研人員告訴記者，近年來，由于各種廣譜及超廣譜藥物的廣泛應(yīng)用，尤其是不合理應(yīng)用，使致病菌對抗生素的耐藥性急劇上升，多重耐藥菌株不斷增多，臨床治療難度增加。“尤其是有的細(xì)菌耐藥基因可通過質(zhì)粒等多種機(jī)制在細(xì)菌間進(jìn)行傳播，造成耐藥菌株在醫(yī)院內(nèi)感染散發(fā)或暴發(fā)流行，使耐藥菌株越來越難以控制，治療困難，死亡率高，這已經(jīng)成為了臨床治療的一大難題?！?同仁醫(yī)院醫(yī)師吳冬介紹說。
　　臨床醫(yī)生對抗生素的選擇使用變得非常困難，因此開展體外抗生素敏感試驗(yàn)非常必要。了解細(xì)菌耐藥譜，對抗菌藥物的臨床使用效果進(jìn)行預(yù)測，將對患者選擇個體化的治療方案提供必不可少的依據(jù)。
　　“通過耐藥性監(jiān)測，有可能使新的耐藥基因在廣泛傳播之前得到控制，防止耐藥菌株的暴發(fā)流行；了解細(xì)菌耐藥性機(jī)制和耐藥趨勢的動態(tài)變化，為制定抗感染措施提供理論依據(jù)。同時，對耐藥性監(jiān)測結(jié)果的分析，可指導(dǎo)臨床正確選擇抗菌藥物?！眳嵌f。
　　他們是如何做到的
　　快速檢測耐藥性，不僅能為臨床治療提供有效、及時的指導(dǎo)，以及防止病原菌產(chǎn)生新的耐藥性，還為臨床爭取了時間。
　　為了解決目前微生物耐藥性檢測標(biāo)準(zhǔn)法（培養(yǎng)法）存在的需要菌分離、時間長等技術(shù)難題，危宏平團(tuán)隊(duì)提出了一種結(jié)合PCR及體外快速表達(dá)蛋白質(zhì)、通過蛋白質(zhì)功能變化測定耐藥性的新策略。這種方法實(shí)現(xiàn)了致病微生物及其耐藥性的聯(lián)合快速檢測，已經(jīng)成功用于多種目前很難測定的耐藥性的快速檢測。
　　他們是如何做到的呢？
　　危宏平告訴記者，首先，他們基于GPF策略設(shè)計了結(jié)核分枝桿菌吡嗪酰胺耐藥性檢測新方法。這種方法能夠在2小時內(nèi)檢測出痰液中的結(jié)核分枝桿菌，并在1天內(nèi)測定其吡嗪酰胺耐藥性。它采取的策略是不依賴測定具體的突變位點(diǎn)，而是直接通過體外快速表達(dá)的吡嗪酰胺酶的功能變化來測定耐藥性，因而有效解決了結(jié)核分枝桿菌吡嗪酰胺耐藥性快速檢測這一挑戰(zhàn)性難題。
　　“這種方法的便利在于，檢測結(jié)果通過顏色變化就可以判讀，不需要復(fù)雜儀器，成本比較低，可以在基層醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)室使用。”危宏平說。
　　從丙肝病毒到“超級耐藥菌”
　　在成功完成了該菌的快速檢測后，他們又開始在丙肝病毒上試驗(yàn)。
　　據(jù)介紹，臨床血清中丙肝病毒（HCV）由于其RNA復(fù)制酶不具有保真功能，通過基因突變規(guī)律來檢測耐藥性是非常困難的。而危宏平團(tuán)隊(duì)通過將其中HCV NS3基因從樣本中擴(kuò)增出來，并在體外快速轉(zhuǎn)錄成蛋白酶，實(shí)現(xiàn)了在10小時內(nèi)完成HCV對兩種美國FDA批準(zhǔn)的特拉普韋和博賽潑維藥物的耐藥性檢測，為HCV病毒耐藥性快速檢測提供了一種新的模式。
　　新德里金屬 -內(nèi)酰胺酶（NDM-1）耐藥基因是2009年從印度分離的一種新耐藥基因。由于帶有這種基因的菌對碳青霉烯類抗生素的廣泛耐藥性，因此被稱為“超級耐藥細(xì)菌”，被世界衛(wèi)生組織認(rèn)為是一種全球性的威脅。危宏平針對該基因進(jìn)一步采用GPF策略。
　　據(jù)介紹，截至目前，在NDM-1的傳播過程中，已有12種NDM突變體報道。但目前用于發(fā)現(xiàn)NDM功能突變體的主要方法是測序和重組表達(dá)，時間長達(dá)幾周、成本高，且不利于及時監(jiān)測NDM-1的流行規(guī)律。而危宏平他們發(fā)明的快速檢測方法，只需要1小時就能檢測NDM-1基因，在1天內(nèi)就能測定其功能突變體。
　　“這些成功的試驗(yàn)驗(yàn)證了GPF策略具有很好的適用性?！蔽：昶秸f，“它克服了目前通過測定基因突變位點(diǎn)來測定耐藥性的局限性，為生長緩慢的細(xì)菌及為無基因突變熱點(diǎn)的耐藥性檢測提供了一條新的技術(shù)途徑，應(yīng)用前景十分廣闊?！彼麄兤诖M(jìn)一步實(shí)現(xiàn)其成果的產(chǎn)業(yè)化，也希望這些科研成果能為克服目前嚴(yán)重的耐藥性危機(jī)提供助力。 　　（原載于《中國科學(xué)報》 2014-05-26 第6版 進(jìn)展)